试验前请仔细阅读说明书，本产品仅供科研实验使用。
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以下情况不予办理退换货：
1、已超过受理期限的产品，如过保质期。
2、由于客户自身操作原因导致实验失败。
3、由于客户没有仔细确认要订购的指标，导致自己的指标定错。
4、产品已使用（质量问题除外）。
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：海藻糖是由两个葡萄糖分子以α ， α- 1- 1 糖苷键连接而成的一种非还原双糖， 广泛存在于细菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆虫、 无脊椎动物和高等植物等多种有机体中。 海藻糖的非还原性决定了它对酸、碱、高温等的稳定性。 另外， 它本身具有很强的吸水性， 使它在生物体内具有抗脱水作用， 在逆境条件下可通过识别外界刺激、产生和传递信号、基因表达和代谢调节来保护植物免受不良环境的伤害。植物体内主要以葡萄糖为底物合成海藻糖，该反应首先在海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthase ，TPS）的作用下，催化尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）和 6-磷酸葡萄糖反应生成中间产物6-磷酸海藻糖， 再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 （trehalose6-phosphatephosphatase ，TPP）的作用下去磷酸化，生成海藻糖。因此，测定TPS活性对于研究植物逆境具有重要意义。
测定意义：海藻糖是由两个葡萄糖分子以α ， α- 1- 1 糖苷键连接而成的一种非还原双糖， 广泛存在于细菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆虫、 无脊椎动物和高等植物等多种有机体中。 海藻糖的非还原性决定了它对酸、碱、高温等的稳定性。 另外， 它本身具有很强的吸水性， 使它在生物体内具有抗脱水作用， 在逆境条件下可通过识别外界刺激、产生和传递信号、基因表达和代谢调节来保护植物免受不良环境的伤害。植物体内主要以葡萄糖为底物合成海藻糖，该反应首先在海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthase ，TPS）的作用下，催化尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）和 6-磷酸葡萄糖反应生成中间产物6-磷酸海藻糖， 再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 （trehalose6-phosphatephosphatase ，TPP）的作用下去磷酸化，生成海藻糖。因此，测定TPS活性对于研究植物逆境具有重要意义。
测定原理：TPS 催化 UDPG 与 G6P 生成海藻糖-6-磷酸，同时产生 UDP；UDP 在丙酮酸激酶与乳 酸脱氢酶作用下， 氧化 NADH 为NAD+，NADH 的下降速率与 UDP 含量成正比， 通过 340nm吸光度下降速率反映 TPS 活性。
需自备的仪器和用品：酶标仪、水浴锅、可调式移液器、 96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂一： 粉剂×1 瓶， -20℃保存； 临用前加入 12mL 试剂五溶解，用不完的试剂分装后-20℃ 保存，禁止反复冻融；
试剂二： 粉剂×2 瓶， -20℃保存； 临用前每瓶加入 10mL 试剂五溶解，现配现用；
试剂三： 粉剂×1 瓶， -20℃避光保存； 临用前加入 0.1mL 试剂五溶解，用不完的试剂分装后 -20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四： 100μL×1 瓶， 4℃避光保存； 临用前低速离心， 以防止试剂沾在管壁；
试剂五：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
工作液的配制： 临用前， 先配置好试剂二和试剂三， 然后取试剂二一瓶， 加入 10μL 试剂三 和 10μL 试剂四， 充分混匀，现配现用。样品测定的准备：
1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104 个）： 提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液）， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次） ；8000g ，4℃离心 10min，取上清， 置冰上待测。
2、组织的处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液） ，冰浴中匀浆。 8000g ，4℃离心 10min，取上清， 置冰上待测。
测定步骤
测定步骤
1 、在 EP 管中加入如下试剂
试剂名称（μL）测定管样本100试剂一100
混匀， 30℃反应 20min ，95℃水浴 2min 灭活， 冷却至室温。 10000g 4℃离心 5min，取上层 反应液待测。
试剂名称（μL）测定管样本100试剂一100
混匀， 30℃反应 20min ，95℃水浴 2min 灭活， 冷却至室温。 10000g 4℃离心 5min，取上层 反应液待测。
2、工作液配制：详见试剂的组成和配制中工作液的配制。3、在 96 孔板中加入如下试剂
反应液20工作液180
混匀，测定 340nm 下反应 5min 后的吸光值 A1 与 10min 后的吸光值 A2 ，ΔA=A1-A2。
反应液20工作液180
混匀，测定 340nm 下反应 5min 后的吸光值 A1 与 10min 后的吸光值 A2 ，ΔA=A1-A2。
TPS 活力计算：
1、按照蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
TPS 活力(nmol/min/mg prot)=ΔA×V 反总÷（ ε×d）×109÷（V 样×Cpr）÷T×10
=1286×ΔA ÷Cpr
2、按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
TPS 活力(nmol/min/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷（ε×d）×109÷（W× V 样÷V 样总） ÷T×10
=1286×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 TPS 活力(nmol/min/104 cell)=ΔA×V 反总÷（ε×d）×109÷（V 样×细胞数量） ÷T×10
=2.57×ΔA
V 反总：反应体系总体积， 0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数， 6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光径， 0.5cm；V 样：加入样本体积， 0.1 mL；V 样总： 加入提取液体积， 1 mL；T： 反应时间， 5 min；10，稀释倍数； Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本质量；细胞数 量， 500 万。
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