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植物铵态氮试剂盒

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植物铵态氮试剂盒说明书

                                                        分光光度法50/48

 

    意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

氮素是构成生物体的一种必需元素,自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮,经过硝化微生物的作用转化成硝态氮,后者被植物或微生物同化成有机氮化物,植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。

 

测定原理

α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热,经氧化脱氨变成相应的α-酮酸,酮酸进一步脱羧变成醛,水合茚三酮则被还原,在弱酸环境中,还原型茚三酮,氨和另一分子水合茚三酮反应, 缩合生成蓝紫色物质,在580nm处有特征吸收峰。

 

自备实验用品及仪器

天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。

 

试剂组成和配制

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1支,4℃避光保存。临用前加0.5mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体25mL×1瓶,4℃保存。

 

样本处理

按照质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,室温匀浆后于25℃,12000g离心10min,取上清待测。

 

测定操作表

 

空白管

测定管

样本(μL

 

200

蒸馏水(μL

200

 

试剂一(μL

300

300

试剂二(μL

10

10

充分混匀,沸水浴5min后自然冷却10min

试剂三(μL

500

500

充分混匀,于1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定580nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管

注意:空白管只需测定一次。

 

计算公式

 

标准曲线:y=0.1535x-0.0279R2=0.999NH4+N含量(μg/g 鲜重)=A+0.0279÷ 0.1535×V反总÷W×V÷V样总)

                = 32.9×A+0.0279÷W

V反总:反应总体积,1.01mLV:反应体系中加入样本体积,0.2mLV样总:加入提取液体积,1mLW:样本质量,g

 

注意事项

1. 提取好的待测液尽快测定,低温保存不得超过24小时。

2. 沸水浴时间不宜过长,否则会对测定结果有影响。

3. 显色后20min内完成测定。

4. 最低检出限为18μg/g

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